Gyakran ismételt kérdések a hibás sejteket

1. E. coli fejezi ki az idegen fehérje. Amikor sonicated, hogy fel van függesztve, triton-X-100 1 %-át tartalmazó PBS-ben. Az ultrahang hatását is jobb. A hatás a triton-X-100 1 %, még mindig nyilvánvaló. Néhány más baktériumok is dolgozik, mint a Streptomyces. Után fejezte ki a rekombináns fehérjék, a sejtek voltak megzavarták ultrahangos sejt zavar, Jégfürdőbe, 400w, használata és a 2s-1s, a zúzott, de a nagy mennyiségű hab keletkezett rövid idő alatt, amely érinti a zúzás erő. Pbs és a trisz pufferek voltak, mint ez. A hiányos töredezettsége, és a célfehérjék ezek a töretlen sejtek, mit kell tennem?

Elemzés: A buborék akarat hozható létre, mert a szonda helyzetét nem kerül a szonda lehet közelében az aljára, a 0,5-1 cm-t; a teljesítmény függvényében az eszköz, de a folyadékszint figyelhető meg, ingadozás, de nem túl erős; választhat ultrahangos sejtek a daráló tört a 3s-10s és törött a 20 - 30 alkalommal. A kürt helyzetét is meg kell jegyezni. Ha a hang rossz, azt ki kell igazítani az időben; figyelembe véve, a koncentráció, a baktériumokat. Megpróbál-hoz növekszik a kötet, ha a zúzás, a Zui erejét nem haladhatja meg a 60 %-át; megpróbál-hoz break 8s 8s, néhány bakteriális, proteineket, nehéz eloszlatni a fehérje-fehérje denaturációt buborékok, ami egy kicsit hosszabb ideig szüneteltethető termelni okozhat. A fehérje megtalálható integrációs szervezetek formájában.

2. Mik a feltételei a Streptomyces (actinomycetes) bevezetése?

Analitikus: actinomycetes tartozik (G + C) moláris százalékos (mol %) a Gram-pozitív (Eubacteria) elágazó csoportja a filogenetikai fa a prokarióta rendszer, amely egyedülálló a prokarióták molekuláris és biológiai tulajdonságokkal rendelkezik. Azonban a különböző csoportok, a cella falán kémiai összetétele jelentősen eltér. Az E. coli ultrahang 400W használatos, és a törés 5s-5s módszer hatékony, de használják a Streptomyces, és nincs hatása a különbség a sejtfal összetétele miatt. A kezelés előtti spinning Streptomyces (actinomycetes) általában úgy, hogy egy bizonyos koncentráció baktérium-szuszpenzió. Az egyedi feltételek segítségével az ultrahangos sejt diszruptor zúzás a: gyűjtése a baktériumok a 24 h kultúra megoldás 5 000 r / min 5 percig összegyűjteni a sejtek; a pH 7,5 Na2HPO mosás-NaH2PO puffer 3-szor, majd a cellák voltak testesült meg a puffer segítségével 1:3 baktérium-szuszpenzió. Elhelyezett egy 40 mL nagy műanyag kémcsőbe; Helyezze a nagy műanyag kémcsövet jeges fürdőbe és összetörni ez egy ultrahangos sejt zavaró (power 200W, 1/2" szonda, összetörni a 30-as, 30-as években időszakos); aprítás, 12 000 r/perc centrifuga nagy sebességű, 30 perc, összegyűjti sejt törmelék és a felülúszó oldat. Mosás sejtek is mosható egyszer lehűtött sóoldattal vagy Tris-HCl-nak, pH 8. Ezen túlmenően az ultrahangos adag nagyban változik a mennyiségű mintát, és a baktériumok. A hatalom lehet 400-600w, 5s, megállt, 5s, zúzott jég fürdő, és a végső koncentrációja 1 mm-es PMSF egészül ki. Annak érdekében, hogy meghatározzák a megfelelő ultrahangos intenzitását és gyakoriságát, szükségszerű bármikor ellenőrizze, hogy a baktériumok teljesen broken.